Pantalla ag específica de próstata. ¿Cuál es el control para el cáncer de próstata?

Pantalla ag específica de próstata Signos y síntomas del cáncer de próstata. la prueba de sangre para detectar el antígeno prostático específico (PSA) o mediante el tacto rectal (DRE). se utiliza para fusionar las imágenes de MRI y TRUS en una pantalla de computadora. ¿Se recomienda el análisis del PSA como examen de detección de cáncer de próstata? Proteína elaborada por la próstata que se encuentra en la sangre. Las concentraciones del antígeno prostático específico (PSA) en la sangre pueden ser más.

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La Tabla 1 muestra las muestras usadas en los presentes estudios.

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Todos los pacientes recibieron prostatectomía radical como monoterapia es decir, sin terapia hormonal o radioterapia. Todas las autopsias se realizaron en el plazo de horas después de la muerte.

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Recientemente se ha informado de pantalla ag específica de próstata hallazgos clínicos y patológicos de estos casos Rubin y col. Cancer Res. El ARN total obtenido se sometió adicionalmente a una ronda adicional de extracción con fenol-cloroformo, se precipitó y se resuspendió en agua libre de ARNsa.

El ARN total de cuatro tejidos normales se combinó en concentraciones iguales para obtener el conjunto de referencia. El ARN total de próstata humana usado en el conjunto de referencia comercial se obtuvo de Clontech, Inc.

Tabla 1. Muestras empleadas en el estudio.

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Las dos muestras de referencia usadas en este estudio se marcaron usando un segundo colorante fluorescente distinguible Cy3 y se incluyó un conjunto de tejido de próstata adyacente normal NAP de cuatro pacientes distinto de pantalla ag específica de próstata aquellos usados en las muestras experimentales y un conjunto comercial de tejidos de próstata normales CP. A diferencia, el conjunto de CP se deriva de 19 individuos con patología de próstata no conocida y también representa un recurso de referencia renovable comercialmente disponible.

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Una ejecución de impresión. Los protocolos para la impresión y el procesamiento posterior de matrices pantalla ag específica de próstata muy conocidos en la técnica. Inicialmente, los datos fueron visualizados 35 como un diagrama de dispersión de intensidades de Cy3 frente a Cy5.

Se desecharon. Los datos se escalaron de forma que el valor de la mediana de la relación promedio para todos los puntos se normalizara a 1,0 por matriz.

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Entonces, estos archivos se importaron a una base de datos de Microsoft Pantalla ag específica de próstata. Antes del agrupamiento, la mediana normalizada de los valores de relaciones de los genes se transformó en logaritmos de base 2 y se filtró para la presencia a través de matrices y se seleccionó para niveles de expresión y patrones dependiendo del conjunto experimental como se establece.

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La Figura 1 proporciona una visión general de la variación en la expresión génica a través de los diferentes especímenes de tejido analizados. Las relaciones entre las muestras experimentales se resumen como dendrogramas Figura 1aen los que el patrón y pantalla ag específica de próstata longitud de las ramas reflejan la vinculación de las muestras. La Figura 1a muestra dendrogramas que revelan la variación en el patrón de expresión génica entre muestras experimentales con las dos referencias empleadas.

Los resultados representan la relación de la hibridación de sondas de ADNc fluorescentes preparadas a partir de cada ARNm experimental con respecto a los conjuntos de referencia respectivos. La saturación del color refleja la magnitud de la relación pantalla ag específica de próstata respecto a la mediana para cada conjunto de muestras. La Figura 1b muestra un diagrama por grupos de los diversos grupos de muestra en comparación con el conjunto de próstata adyacente normal como referencia.

Por este procedimiento, genes se seleccionaron del conjunto de datos de referencia de NAP. Porciones de agrupaciones b4 y b6 se muestran ampliadas con genes seleccionados mostrados usando la nomenclatura de genes de la Organización del genoma humano HUGO. La Figura 1c muestra un diagrama por grupos de los diversos grupos de muestra comparados con la referencia del conjunto de próstata comercial. La agrupación c5 representa genes con una baja representación en el conjunto comercial. Condiciones benignas de la pantalla ag específica de próstata tales como HPB y NAP se agrupan por separado de líneas de células de PCA malignas o tejidos, independientemente del conjunto de referencia usado.

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También se presentan formas de la matriz de Eisen Eisen y col. Las barras a la izquierda o derecha de cada matriz representan agrupaciones de genes coordinadamente expresados que destacan interrelaciones entre especímenes.

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También se obtuvieron datos del perfilado de la expresión de especímenes de tejido de próstata adicionales perfilados contra un conjunto de referencia de próstata comercial CPP. Un total de 53 especímenes de próstata se perfilaron contra el conjunto comercial. Por este procedimiento se seleccionaron genes. Los datos se amplían en la Figura 1c con 40 muestras adicionales que incluyen todas las de la Figura pantalla ag específica de próstata, y también incluye 28 especímenes de próstata adicionales.

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Los datos se evaluaron a continuación examinando grupos funcionales de genes con nombre conocidos. Las estadísticas de la t se clasificaron de dos formas.

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pantalla ag específica de próstata Primero, se clasificaron por magnitud absoluta, que tiene en cuenta la variabilidad entre muestras en las relaciones de expresión. Entonces se representó un diagrama de dispersión de los genes con los mayores tamaños del efecto y las mayores estadísticas de la t véase la Figura 7.

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Se nombran los genes seleccionados y se muestran genes para cada conjunto pantalla ag específica de próstata datos. Se muestran los nombres o símbolos de genes seleccionados como se especifica por la Nomenclatura de genes de la Organización del genoma humano HUGO. Los genes que crearon ambas listas también se consideraron por separado con el fin de identificar posibles genes candidatos.

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Se muestran los nombres o símbolos de los genes como se especifica por la nomenclatura de genes de la Organización del genoma humano HUGO. Se usó la misma convención para representar cambios en niveles de transcritos que en la Figura 1. El orden de las muestras de la Figura 1 se conservó por claridad. La Figura 8 muestra una agrupación centrada de genes relacionados con PCA. Se ha mostrado que varios son desregulados en PCA. De los genes analizados, 59 se seleccionaron con este criterio.

El factor de crecimiento endotelial vascular VEGFespecífica de la detención del crecimiento GAS 1colecistoquinina CCKproteína de unión a amilorida ABP1estuvieron entre los genes regulados por disminución en el conjunto pantalla ag específica de próstata próstata adyacente normal cuando se comparó con el conjunto comercial.

Se resolvieron treinta microgramos de ARN total por gel de agarosa con formaldehído desnaturalizante y pantalla ag específica de próstata transfirieron sobre membrana Hybond Amersham por un sistema de transferencia capilar.

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Las hibridaciones se realizaron mediante el procedimiento descrito por Church y Gilbert, La señal se visualizó y se cuantificó por un sistema de detección y cuantificación de la radiactividad. Para la estimación de las veces relativas se calculó la relación entre las señales obtenidas de sondas de hepsina y GAPDH. Kononen y col.

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El ensamblaje se mantiene pantalla ag específica de próstata una guía de posición X-Y que se ajusta manualmente por micrómetros digitales. Pequeñas biopsias son recuperadas de regiones seleccionadas de tejido de donante y se disponen en matrices en un nuevo bloque de parafina. La clasificación de tumores de próstata se realizó usando el sistema descrito por Gleason Gleason, Cancer Chemother Rep. Las fases patológicas para las prostatectomías radicales se determinaron usando el sistema de estadificación de TNM Schroder y col.

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Las secciones de TMA se cortaron a intervalos de cinco micrómetros de grosor para inmunohistoquímica. Las secciones iniciales se tiñeron para hematoxilina y eosina para verificar la histología.

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Todos los portaobjetos se colocaron en tampón citrato 10 milimolar pH 6,0 y se calentaron en microondas durante 5 minutos. Se realizó inmunohistoquímica convencional del complejo de biotina-avidina.

Causas y prevención.

La intensidad de inmunotinción se puntuó por un anatomopatólogo genitourinario especializado como ausente, débil, moderada o fuerte. La puntuación se realizó usando un sistema de pantalla ag específica de próstata en un modo ciego sin conocimiento de la puntuación de Gleason global por ejemplo, grado de tumortamaño del tumor o desenlace clínico Perrone y col.

Se evaluaron seis muestras de PCA de cada caso y se calculó una mediana de la puntuación.

La inmunohistoquímica se realizó como antes usando un anticuerpo policlonal de conejo contra el extremo N de pim1 Santa Cruz Biotechnology a una dilución Todas las muestras se revisaron de forma ciega con respecto a todos los datos de patología y clínicos relacionados. Se pantalla ag específica de próstata la prueba del orden logarítmico para evaluar las diferencias en la inmunotinción con hepsina para la progresión libre de enfermedad.

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Las micromatrices usadas en este estudio se muestran en la Figura 3b. La tinción se hizo con hematoxilina y eosina para verificar la histología. Las próstatas benignas demuestran expresión débil en las células luminales secretoras y tinción fuerte de células basales.

La Figura 3c muestra un histograma de expresión de la proteína de hepsina por tipo de tejido. La intensidad relativa de la tinción de Dietas faciles se evaluó cualitativamente y se clasificó. El porcentaje de tinción de hepsina por categoría se muestra en el eje y.

Los controles internos mostraron que el tejido de hígado, como se describe previamente, se tiñó fuertemente para hepsina. La mayoría de los casos de tinción pantalla ag específica de próstata o ausente de hepsina se observaron en especímenes de próstata benignos. En conjunto, la expresión de la proteína de hepsina en PCA guarda una relación inversamente a las medidas del pronóstico del paciente.

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La hepsina es una proteína transmembrana de 51 kDa con la mayor expresión en el hígado y, como el Pantalla ag específica de próstata, es una serina proteasa Kurachi y col. El dominio de proteasa de hepsina tiene acceso al espacio extracelular y posiblemente puede activar otras proteasas o degradar componentes de la matriz extracelular.

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La función de hepsina se entiende poco. Se ha propuesto que tiene una función en controlar el crecimiento celular Torres-Rosado y col. Adicionalmente, se ha mostrado que los niveles de ARNm de hepsina son elevados en carcinomas de ovario Tanimoto y col.

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Aunque es muy conocido que el oncogén myc se expresa en exceso en muchos PCA Buttyan y col. Estudios previos sugieren que la interacción cooperativa entre pim-1 y myc puede inducir transformación de pantalla ag específica de próstata linfoides, promoviendo la progresión del ciclo celular y bloqueando la apoptosis Shirogane y col.

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La próstata benigna demostró expresión ausente o débil en las células luminales secretoras. La intensidad relativa de la tinción de pim-1 se representa en la leyenda incluida.

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Porcentaje de tinción de pim-1 por categoría mostrado en el eje y. Se encontró que la proteína pim-1 estaba marcadamente expresada en exceso en PCA Figura 4. Las expresión en exceso crónica de myc en la próstata ventral de ratones transgénicos indujo anomalías epiteliales similares a NIP de bajo grado, pero nunca se observó la progresión a adenocarcinoma en este modelo Pantalla ag específica de próstata y col.

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La presente invención no se limita a un mecanismo cualquiera. Sin embargo, se contempla que la expresión en exceso de pim-1 puede potenciar carcinogénesis de próstata inducida por myc. Véase la Figura 2 para los niveles de expresión génica. Tissue Core.

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Los datos clínicos y de patología para todos los pacientes se adquirieron con la aprobación del Comité de ética médica en la Universidad de Michigan.

Los datos clínicos, de patología y de TMA detallados se mantienen en una base de datos relacional segura Manley y col. Brevemente, secciones alternas pantalla ag específica de próstata la próstata se sometieron a revisión histológica.

Pruebas para diagnosticar y determinar la etapa del cáncer de próstata

Estas muestras sólo se recogieron de pacientes que habían firmado un consentimiento informado aprobado por el IRB. Estas muestras congeladas no estuvieron disponibles para los investigadores hasta que se realizó un diagnóstico y estadificación adecuado.

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Hasta la fecha se han realizado 23 autopsias completas con una mediana de tiempo de 2 horas desde la muerte hasta la autopsia. Este procedimiento se ha descrito previamente en detalle Rubin y col. Los objetivos y procedimientos para la donación de tejidos se explicaron al paciente.

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Habiendo decidido participar en este programa de donantes de tumores aprobado por el IRB, el permiso para la autopsia se obtiene antes de la muerte, con el consentimiento proporcionado por el paciente, o por el familiar inmediato.

Las muestras fijadas se incorporaron en parafina y se usaron para el desarrollo de TMA.

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Las vesículas seminales se cortaron perpendicularmente a su entrada en la próstata y se presentaron como el margen de la vesícula seminal. Las próstatas para este estudio se incorporaron todas parcialmente, tomando pantalla ag específica de próstata completas alternas del vértice, el medio y la base. Los tumores se clasificaron usando el sistema de clasificación de Gleason Gleason, Cancer Chemother.

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Entonces, las transferencias Western se procesaron como se ha descrito anteriormente. Para este estudio se usaron cinco TMA.

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Se recomienda esto debido a que los tejidos elegidos como diana pueden no ser lo que fueron cuando realmente se transfirieron. Por tanto, la verificación se realizó en cada etapa. Se midió toda la tinción nuclear positiva, independientemente de la intensidad.

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Los especímenes se evaluaron para la expresión de Ki como se ha descrito previamente Perrone y col. Veintiséis de estos casos se observaron en interconsulta con un anatomopatólogo y se consideraron diagnósticamente difíciles, requiriendo revisión por el experto y caracterización adicional.

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Un procedimiento a modo de ejemplo de inspeccionar los datos Eisen y col. Los genes que son invariables entre tejidos de tumor y benignos se representan por un color negro y los elementos ausentes por un color gris.

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E Los genes que se identifican por micromatriz de ADN pueden entonces validarse al nivel de los transcritos por ejemplo, transferencia Northern, RT-PCR o al nivel de las proteínas por ejemplo, inmunotransferencia. Pantalla ag específica de próstata Entonces, los portaobjetos de micromatrices de tejido pueden analizarse usando diversos procedimientos moleculares o bioquímicos en este caso inmunohistoquímica.

I Tanto los datos de micromatrices de ADN como de tejido tienen aplicaciones clínicas. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a: 1. Uso de perfiles de expresión génica para predecir el pronóstico de pacientes, 2.

Las muestras Dhanasekaran y col. La muestra experimental se marcó en el canal de Pantalla ag específica de próstata mientras que la muestra de referencia conjunto de tejido de próstata benigno se marcó en el canal de Cy3.

Conjunto se refiere a ARN de tejidos de próstata normales obtenidos de una fuente comercial. También se examinan diversas líneas de células de la próstata. Se observó un gran contraste en los niveles de AMACR en epitelios malignos con respecto a epitelios benignos adyacentes.

Con el fin de evaluar la expresión de proteínas de AMACR con respecto a cientos de especímenes de próstata, se cuantificaron los datos de micromatrices de tejido.

Los niveles de proteínas de AMACR se evaluaron pantalla ag específica de próstata continuación para la asociación con reaparición de PSA tras cirugía en casos de prostatectomía con una mediana del tiempo de seguimiento de 3 años.

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No se identificó asociación estadísticamente significativa. La gran diferencia en los niveles de proteínas de AMACR entre células epiteliales secretoras normales y células malignas proporciona un uso clínico para probar la expresión de AMACR en biopsia por punción de especímenes de próstata. En muchos especímenes de. Los resultados se muestran pantalla ag específica de próstata la Tabla 2. Se tomaron muestras clínicas de la serie de prostatectomía radical y del programa Rapid Autopsy en la Universidad de Michigan.

Para el desarrollo de TMA, las muestras se incorporaron en parafina. Estos portaobjetos se usaron como molde para la construcción de las seis TMA usadas en este estudio.

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Estos carcinomas de colon poco diferenciados tuvieron una alta frecuencia del fenotipo de inestabilidad de microsatélites. Para examinar pantalla ag específica de próstata la diferencia entre diferentes tipos de tejido se realizó una comparación por emparejamiento a posteriori.

Se examinó un subconjunto de 22 casos de Pantalla ag específica de próstata en el que los pacientes recibieron cantidad variable y tipos de tratamiento antiandrogénico antes de la cirugía.

En este conjunto de datos no hubo una correlación ni entre la duración del tratamiento ni el tipo de tratamiento monoterapia o supresión hormonal completa para deprivación de hormonas y la expresión de AMACR.

Bajo las mismas condiciones, el PSA, un gen conocido por ser regulado por el receptor de andrógenos, mostró una disminución de la expresión de proteínas.

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Sin embargo, se contempla que otra explicación para estas observaciones era la de la expresión en exceso de AMACR producido en PCA, pero como estos tumores se diferenciaron poco, como en el PCA resistente al tratamiento hormonal, la pantalla ag específica de próstata de AMACR se reguló por disminución tanto directamente como indirectamente debido al procedimiento de desdiferenciación.

Los tumores poco diferenciados tienen distintas alteraciones moleculares que los distingue de los tumores colorrectales comunes pantalla ag específica de próstata bien a moderadamente diferenciados Hinoi y col. Este tumor todavía forma estructuras grandulares bien definidas.

Se tomó tejido adyacente normal cuando estuvo disponible.

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Se seleccionaron veinticuatro casos de adenocarcinoma colorrectal 16 carcinomas de bien pantalla ag específica de próstata moderadamente diferenciados y 8 carcinomas mínimamente diferenciados de células grandes y 8 adenomas colorrectales endoscópicamente derivados para inmunotinción para AMACR.

Sería bueno que le pregunte a su médico si él o ella planea hacer esto. Es probable que se le administren antibióticos antes de la biopsia, y posiblemente por un día o dos después del procedimiento para reducir el riesgo de infección.

La terapia con hormona antiandrogénica también se usa, sola o conjuntamente con cirugía o radiación.

Los resultados pueden ser reportados como:. Esto se conoce como resultado negativo falso.

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En teoría, la puntuación de Gleason puede estar entre 2 y 10, pero las puntuaciones por debajo de 6 rara vez se usan. En realizaciones preferentes, la presencia de una secuencia de una región cromosómica que se presenta en la.

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Los métodos incluyen, por ejemplo, métodos basados en secuenciación de didesoxi aunque también se conocen otros métodos tales como la secuenciación de Maxam y Gilbert véase, por ejemplo, Sambrook y Russell, mencionado anteriormente.

En realizaciones habituales, el CNA de un paciente se secuencia usando un método de pantalla ag específica de próstata a gran escala que proporciona la capacidad de. La incorporación de nucleótidos durante la síntesis se detecta midiendo la luz que se genera cuando se incorpora un nucleótido.

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La tecnología Illumina implica la unión de ADN genómico fragmentado de forma aleatoria a una superficie ópticamente transparente, plana. Los fragmentos de ADN unidos se prolongan y se amplifican por puente para crear.

Las biopsias son, en general, bien toleradas, con dolor y hemorragia mínimos.

Estos moldes se secuencian usando una tecnología de secuenciación por síntesis que usa terminadores reversibles con colorantes fluorescentes que se pueden retirar. También se pueden usar métodos que usan secuenciación mediante hibridación.

Para esa prueba, se envía una muestra de sangre a un laboratorio para ser analizada.

Los oligonucleótidos se hibridan y se ligan; La liberación preferente mediante ADN ligasa para emparejamiento de secuencias da como resultado una señal informativa del oligonucleótido en esa posición. Por lo tanto, en un aspecto, la presente divulgación proporciona el uso de al menos un oligonucleótido para.

Análisis del antígeno prostático específico (PSA)

La secuencia de nucleótidos del oligonucleótido se encuentra en una región cromosómica que se presenta. Cada oligonucleótido debería tener de aproximadamente 18 a nucleótidos, o de 20 a aproximadamente 50 Nucleótidos, y debería ser capaz de hibridarse, en condiciones de hibridación rigurosas, a la región cromosómica en la que se encuentra la secuencia. Las longitudes totales de este tipo se pantalla ag específica de próstata en las Tablas y deberían ser evidentes a partir de las Tablas A-D.

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Preferentemente, en el kit de la presente divulgación, diferentes conjuntos de oligonucleótidos corresponden a diferentes regiones cromosómicas dentro de la misma tabla. Pantalla ag específica de próstata realizaciones preferentes, el kit es una micromatriz con los oligonucleótidos mencionados anteriormente. En una realización, el kit de la presente divulgación incluye una pluralidad de conjuntos de oligonucleótidos capaces de hibridarse a las regiones cromosómicas que se presentan en la Tabla 2, Tabla 3, Tabla 4, y en la Tabla 5, respectivamente.

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pantalla ag específica de próstata Es decir, el kit incluye sondas de oligonucleótidos que corresponden a todas y cada una de las regiones cromosómicas que se presentan en las Tablas 2, 3, 4, y 5 o que se emparejan con todas y cada una de las secuencias que se presentan en las Tablas A, B, C, y que D de modo que todos los ADN exentos de pantalla ag específica de próstata en circulación obtenidos a partir de cualquier región cromosómica que se presenta en las Tablas se pueden detectar.

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En algunas realizaciones, un dispositivo de diagnóstico comprende sondas para detectar al menos 2, 3, 4, 5, 6, Dietas rapidas, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 75, oo pantalla ag específica de próstata regiones cromosómicas que se presentan en las Tablas En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona sondas unidas a un soporte sólido, tal como un portaobjetos o chip de matriz, por ejemplo, como se describe en DNA Microarrays: A Molecular Cloning Manual,Eds.

La construcción de los dispositivos de este tipo se pantalla ag específica de próstata bien en la técnica, por ejemplo como se describe en los documentos de Patente de Estados Unidos y en las Publicaciones de Patente de Estados Unidos N. Mutat 19 4 : abril de ; y McGail et al. Como alternativa, una sola sonda para una región cromosómica se puede inmovilizar en una superficie sólida.

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Los polinucleótido sintéticos habituales pueden tener una longitud de aproximadamente nucleótidos. En consecuencia. Los kits pueden incluir opcionalmente diversos componentes de hardware electrónicos; por ejemplo, matrices "chips de.

Como puede pantalla ag específica de próstata alguien con experiencia en la materia, los biomarcadores se pueden usar para analizar una muestra de un paciente en la que el biomarcador Dietas faciles se ha observado de manera no frecuente en un paciente normal para aumentar la sensibilidad de la detección.

Por lo tanto, por ejemplo, las matrices usadas para detectar las regiones cromosómicas pueden incluir las que identifican las regiones cromosómicas en las Tablas 2 y 3 que se indican en fuente negrita. Como se entiende en la técnica, otros criterios, pantalla ag específica de próstata ejemplo, criterios clínicos, etc.

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En consecuencia. Por lo general esto significa un aumento en el nivel en comparación con un valor índice. Por lo general esto significa una disminución en el nivel en comparación con un valor índice.

Opcionalmente, un aumento de la probabilidad del. Por lo tanto, se puede proporcionar un valor del ensayo mediante a ponderación del estado o cantidad determinados de cada molécula de ADN exento de células en pantalla ag específica de próstata con un coeficiente definido previamente, y b combinación del estado o cantidad ponderados para proporcionar un valor pantalla ag específica de próstata ensayo.

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La etapa de combinación puede ser cualquiera de adición recta o ponderación es decir, igualmente ponderado o mediante un coeficiente definido pantalla ag específica de próstata diferente. Se pueden conectar otros muchos dispositivos, tales como una interfaz de red conectada a través de un puerto de serie. Por lo tanto, la presente divulgación proporciona sistemas relacionados con los métodos de la divulgación mencionados anteriormente.

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Las moléculas de ADN exento de células en circulación se pantalla ag específica de próstata de una muestra de sangre o suero o plasma de un paciente, y las secuencias de todas las moléculas de ADN exento de células en circulación se obtienen usando el analizador de muestras. El instrumento de secuenciación se usa para secuenciar las moléculas de ADN exento de células en circulación, y obtener las secuencias de estas moléculas.

Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de ilustración solamente y no a modo de limitación.

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La presente invención se dirige a esa necesidad. Los métodos, kits y pantalla ag específica de próstata de la presente invención se definen en las reivindicaciones adjuntas 1 a 9. La invención también proporciona un kit que comprende una pluralidad de oligonucleótidos, en el que cada oligonucleótido tiene de aproximadamente 18 a nucleótidos y tiene una secuencia de nucleótidos que se encuentra en una región cromosómica que se presenta en la Tabla 3; en el que dicha pluralidad comprende oligonucleótidos que corresponden a todas y cada una de las regiones cromosómicas que se pantalla ag específica de próstata en la Tabla.

La invención también proporciona un sistema para analizar ADN exento de células en circulación, que comprende:. En realizaciones preferentes, las moléculas de ADN exento de células tienen secuencias que se encuentran en diferentes regiones cromosómicas en la misma tabla seleccionada entre las Tablas Preferentemente, diferentes conjuntos de oligonucleótidos corresponden a diferentes regiones cromosómicas en la misma tabla seleccionada entre las Tablas El pantalla ag específica de próstata incluye las etapas de: a determinar, en una muestra que es sangre, suero, o plasma de un paciente, Adelgazar 30 kilos presencia o ausencia o la cantidad de, al menos 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, o al menos 50 moléculas de ADN exento de células cada una teniendo una secuencia que se encuentra en una.

En realizaciones preferentes, las moléculas de ADN exento de células tienen secuencias que se encuentran en diferentes regiones cromosómicas en la misma tabla elegida entre las Tablas En algunas realizaciones, la presencia del al menos un biomarcador en CNA se determina mediante secuenciación.

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En algunas pantalla ag específica de próstata, la presencia del al menos un biomarcador en CNA se determina usando una matriz. En algunas. En algunas realizaciones, se. Las Tablas de las Secuencias A, B, C, y D proporcionan ejemplos de secuencias que corresponden a las regiones cromosómicas que se presentan en la Tabla 2, Tabla 3, Tabla 4, y Tabla 5, respectivamente.

La denominación N x en la Tablas A-D se refiere a secuencias de elementos repetitivos.

Las posiciones del nucleótido los cromosomas se enumeran de acuerdo con el genoma del Homo sapiens ser humanoConstrucción Como se entiende la técnica, en el genoma de los individuos existen polimorfismos de origen natural. Por lo tanto, cada región del cromosoma enumerada en las tablas incluye variantes alélicas así como la secuencia en particular en la base de datos, por ejemplo, las secuencias en las Tablas A-D corresponde a las regiones Dietas faciles indicadas.

La expresión "región cromosómica" incluye cualquier variante o versión corregida de la misma región como se define en las Tablas En el contexto de la presente invención, "detectar la presencia de una región cromosómica" en CNA, se refiere a detectar por qué secuencia de una región cromosómica mostrada en la Tabla 2, 3, 4, o pantalla ag específica de próstata, en la que la secuencia detectada se puede asignar de forma inequívoca a esa región cromosómica.

La expresión pantalla ag específica de próstata un biomarcador" como se usa en el presente documento se refiere a la detección de una secuencia de una región cromosómica enumerada en la Tabla 2, Tabla 3, Tabla 4, o Tabla 5.

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Por pantalla ag específica de próstata tanto, en los métodos de detección que buscan hibridación, la sonda se hibrida específicamente a esa región. En los métodos de detección que usan amplificación, el cebador es se hibrida específicamente a esa región. Como se pantalla ag específica de próstata en el presente documento, la expresión "sustancialmente 25 complementaria" se refiere a secuencias que son complementarias excepto para regiones secundarias de faltas de coincidencias.

Plymouth, Minn. La relajación de la rigurosidad las. Un cebador es preferentemente un oligodesoxirribonucleótido monocatenario.

El cebador incluye una "región de hibridación" exacta o sustancialmente complementaria con la secuencia diana, preferentemente con una longitud de aproximadamente 15 a aproximadamente 35 nucleótidos.

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Un oligonucleótido cebador puede consistir. Una sonda para detección de las secuencias de biomarcador que se describen en el presente documento puede tener cualquier longitud, por ejemplo, una longitud de pb. Por lo general, ensayos basados en sonda, las sondas de hibridación que tienen menos pantalla ag específica de próstata 50 pb son precedentes.

Estas bases pueden servir para una serie de fines, por ejemplo, para estabilizar o desestabilizar la hibridación; para estimular o inhibir la degradación de sondas; o como puntos de unión para restos detectables o restos inactivadores.

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Otros ejemplos de restos de base modificados, no convencionales, o derivatizados se pueden encontrar en los documentos de Patente de Estados Unidos N. Los polinucleótidos Se pueden sintetizar directamente en el sustrato, o sintetizar por separado del sustrato y a continuación se pueden fijar al sustrato.

Las matrices se preparan usando métodos conocidos. La invención se basa, al menos en parte, en la identificación de secuencias pantalla ag específica de próstata CNA de regiones cromosómicas en.

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Por lo tanto, la invención proporciona métodos y dispositivos para analizar la presencia de secuencias de una región cromosómica pantalla ag específica de próstata corresponde a las regiones cromosómicas que se presentan en la Tabla 2, Tabla, 3, Tabla 4, o Tabla 5.

En consecuencia, en un aspecto, la divulgación proporciona un método para analizar CNA en una muestra sangre. En otras palabras, el ADN exento de células en. En una realización, se proporciona un método para analizar ADN exento de células en circulación en una muestra de un paciente, que comprende determinar, en una muestra que es sangre, suero, o plasma, la presencia o la cantidad de, una pluralidad de moléculas de ADN exento de células en circulación cada una con una secuencia con una longitud de al menos La buena dieta nucleótidos que se encuentra en la misma una sola región cromosómica que se presenta en 5 la Tabla 2, Tabla 3, Tabla 4, o Tabla 5 o cada una con una secuencia de nucleótidos con una longitud de al menos 25 pantalla ag específica de próstata consecutivos que es parte de la misma secuencia que se presenta o en la Tabla A, Tabla B, Tabla C.

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En realizaciones preferentes, las moléculas de ADN exento de células tienen secuencias pantalla ag específica de próstata se encuentran en diferentes regiones cromosómicas en la misma tabla que se elige entre las Tablas En una realización específica, se determina la. En una realización específica, se determina la presencia o ausencia o las cantidades de, al menos 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 50, 45.

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En una realización específica, el método para analizar ADN exento de células en pantalla ag específica de próstata incluye las etapas de:. En otra realización específica, el método para analizar ADN exento de células en circulación incluye las etapas de: aislar, a partir de una muestra de sangre, suero, o plasma de un paciente, sustancialmente todas las moléculas de ADN exento de células en circulación que tengan una longitud de al menos 20, 25, 30, 40, 50, 75 o nucleótidos.

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Cada una de las sondas de oligonucleótidos tiene una secuencia de nucleótidos idéntica a una parte de la secuencia de una región cromosómica elegida entre las Tablas o una secuencia que se presenta en la Tablas A-D. Por lo tanto, si una molécula de ADN en circulación se hibrida pantalla ag específica de próstata condiciones rigurosas a una de las sondas de oligonucleótidos, esto indica que la molécula de ADN en circulación tiene una secuencia de nucleótidos que se encuentra en una región cromosómica que se presenta en la Tabla 2, Tabla 3, Tabla 4, o Tabla 5.

El método incluye las etapas de: a determinar, en una muestra que es sangre, Dietas faciles, o plasma de un paciente, la presencia o ausencia pantalla ag específica de próstata la cantidad de, al menos 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, o al menos 50 moléculas de ADN exento de células en circulación cada una con una secuencia con una longitud de al menos 25 nucleótidos que se encuentra en una región cromosómica diferente que se presenta en la Tabla 2, Tabla 3, o Tabla 4 o que tiene una secuencia de nucleótidos con una longitud de al menos 25 nucleótidos consecutivos que es parte de una de las secuencias que pantalla ag específica de próstata presentan en la Tabla A, Tabla B, o Tabla C ; y b.

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En una realización específica, sustancialmente todas las moléculas de ADN exento de células en circulación que tengan una longitud de al menos 20, 25, 30, 40, 50, 75 o nucleótidos consecutivos de longitud, o con una longitud entre 50 y nucleótidos, se aíslan de una muestra de sangre, suero, o plasma de un paciente.

En otra realización específica, sustancialmente todas las moléculas de ADN exento de células en circulación que tengan una longitud de al menos 20, 25, 30, 40, 50, pantalla ag específica de próstata o nucleótidos consecutivos de longitud, o una longitud entre 50 y nucleótidos, se aíslan de pantalla ag específica de próstata muestra de sangre, suero, o plasma de un paciente.

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Estas moléculas de ADN exento de células en circulación se hibridan a una micromatriz que se ha descrito anteriormente pantalla ag específica de próstata el contexto 35 del kit de la invención para determinar si una de las moléculas de ADN exento de células circulación se hibrida a una de una pluralidad de sondas de oligonucleótidos en condiciones rigurosas. Por lo tanto, si una molécula de ADN en circulación se indica en condiciones rigurosas a pantalla ag específica de próstata de las sondas de oligonucleótidos, esto indica que la molécula de ADN en circulación tiene una secuencia de nucleótidos que se encuentra en una región cromosómica que se presenta en la Tabla 2, Tabla 3, o Tabla 4.

En las diversas realizaciones mencionadas anteriormente, preferentemente las moléculas de ADN exento de células en circulación tienen una longitud de al menos 25 nucleótidos consecutivos preferentemente una longitud de al menos 50, 70, 80,o nucleótidos consecutivos. A continuación el suero o plasma de la muestra de sangre se analiza para la presencia de un ADN exento de células en circulación o biomarcador como se describe en el presente documento.

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Por lo tanto, en esta. En la técnica se proporcionan amplias directrices para su realización. Innis, et al.

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Aunque los métodos prostata lettura usar etapas de PCR, también se pueden usar otros protocolos de amplificación.

Los métodos de amplificación adecuados incluyen reacción en cadena de ligasa véase, por ejemplo, Wu y Wallace, Genomics 4:; ensayo de desplazamiento de hebra véase, por ejemplo, Walker et al. Abramson y Myers proporcionan una revisión de métodos de amplificación conocidos se proporciona, por ejemplo, en Current Opinion in Biotechnology 4: Los oligonucleótidos se pueden preparar mediante cualquier método adecuado, normalmente mediante síntesis química, y también se pueden adquirir en fuentes comerciales.

En una realización, el biomarcador se identifica mediante hibridación en condiciones de hibridación específicas de. Los formatos de hibridación adecuados se conocen bien la técnica, e incluyen, pero no se limitan a, pantalla ag específica de próstata en fase de solución, fase sólida, formatos de matriz de oligonucleótidos, fase mixta, o pantalla ag específica de próstata in situ.

En este tipo de reacción, la hibridación con una sonda de oligonucleótidos específica se produce durante el programa de. Los ejemplos para estos formatos de ensayo son sondas de hibridación por transferencia de energía de resonancia fluorescente, sondas moleculares, sondas moleculares Scorpion, y sondas de hibridación de exonucleasa por ejemplo, revisado en Bustin, J.

Los formatos de ensayo adecuados incluyen formatos basados en matriz, descritos con mayor detalle a continuación en la sección de "Dispositivos", en los que la sonda por lo general inmovilizada. Como alternativa, la diana se puede inmovilizar. Los formatos en los que las sondas se inmovilizan sobre un soporte sólido, el ADN diana por lo general se etiqueta, normalmente durante la amplificación. En el documento WO.

En realizaciones preferentes, la presencia de una secuencia de una región cromosómica que se presenta en la.

Los métodos incluyen, por ejemplo, métodos basados en secuenciación de didesoxi aunque también se conocen otros métodos tales como la secuenciación pantalla ag específica de próstata Maxam y Gilbert véase, por ejemplo, Sambrook y Russell, mencionado anteriormente. En realizaciones habituales, el CNA de un paciente se secuencia pantalla ag específica de próstata un método de secuenciación a gran escala que proporciona la capacidad de.

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La incorporación de nucleótidos durante la síntesis se detecta midiendo la luz que se genera cuando se incorpora un nucleótido. La tecnología Illumina implica la unión de ADN genómico fragmentado pantalla ag específica de próstata forma aleatoria a una superficie ópticamente transparente, plana. Los fragmentos de ADN unidos se prolongan y se amplifican por puente para crear.

Estos moldes se secuencian usando una tecnología de secuenciación por síntesis que usa terminadores reversibles con colorantes fluorescentes que se pueden retirar. También se pueden usar métodos que usan secuenciación mediante hibridación.

Los oligonucleótidos se hibridan y se ligan; La liberación preferente mediante ADN ligasa para emparejamiento de secuencias da como resultado una señal informativa del oligonucleótido en esa posición.

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Por lo tanto, en un aspecto, la presente divulgación proporciona el uso de al menos un oligonucleótido para. La secuencia de nucleótidos del oligonucleótido se encuentra en una región cromosómica que se presenta.

Cada oligonucleótido debería tener de aproximadamente 18 Dietas faciles nucleótidos, o de 20 a aproximadamente 50 Nucleótidos, y debería ser capaz de hibridarse, en condiciones de hibridación rigurosas, pantalla ag específica de próstata la región cromosómica en la que se encuentra la secuencia. Las longitudes totales de este tipo se indican en las Tablas y deberían ser evidentes a partir de las Tablas A-D.

Preferentemente, en el kit de la presente divulgación, diferentes conjuntos de oligonucleótidos corresponden pantalla ag específica de próstata diferentes regiones cromosómicas dentro de la misma tabla. En realizaciones preferentes, el kit es una micromatriz con los oligonucleótidos mencionados anteriormente. En una realización, el kit de la presente divulgación incluye una pluralidad de conjuntos de oligonucleótidos capaces de hibridarse a las regiones cromosómicas que se presentan en la Tabla 2, Tabla 3, Tabla 4, y en la Tabla 5, respectivamente.

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Es decir, pantalla ag específica de próstata kit incluye sondas de oligonucleótidos que corresponden a todas y cada una de las regiones cromosómicas que se presentan en las Tablas 2, 3, 4, y 5 o que se emparejan con todas y cada una de las secuencias que se presentan en las Tablas A, B, C, y que D de modo que todos los ADN exentos de células en circulación obtenidos a partir de cualquier región pantalla ag específica de próstata que se presenta en las Tablas se pueden detectar.

La preparación de un kit de este tipo debería ser evidente para un experto en la materia. En algunas realizaciones, un dispositivo de diagnóstico comprende sondas para detectar al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 75, oo las regiones cromosómicas que se presentan en las Tablas Pantalla ag específica de próstata algunos aspectos, la presente divulgación proporciona sondas unidas a un soporte sólido, tal como un portaobjetos o chip de matriz, por ejemplo, como se describe en DNA Microarrays: A Molecular Cloning Manual,Eds.

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Hola doc. Podria hacer un video de los factores de transferencia. Por favor, saqueme de las dudas como siempre lo hizo 😊. Y muchas gracias x sus consejos

Por lo tanto, por ejemplo, las matrices usadas para detectar las regiones cromosómicas pueden incluir las que identifican las regiones cromosómicas en las Tablas 2 y 3 que se indican en fuente negrita. Como se entiende en la técnica, otros criterios, por ejemplo, criterios clínicos, etc.

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